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生化检验中的三种空白概念

2017-9-4 09:55 阅读: 315 评论: 0 编辑: 南国知心
[导读]1、试剂空白:   由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上说,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把样本换成蒸 ...

1、试剂空白:

  由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上说,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把样本换成蒸馏水来测量。

  在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水,测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异,所以要求每次都要测定试剂空白,称为实时试剂空白。

  在全自动分析仪上,大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度,在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白,因为它们全是先加入样本后加试剂,为了折中,只好在定标时做一个试剂空白,保存起来,需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法,对于比较稳定的试剂来讲,对结果影响不大。

  通俗的讲,日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中,然后依次加入R1试剂、R2试剂,所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7170CALIBRATION中是可以看到的,S1ABS就是代表试剂空白吸光度,在CALIBRATION画面里的下方找到Reaction Monitor(反应监察),其中STD就是代表试剂空白反应曲线。为了减小误差,日立仪器会连续做两次测定,所以你看到FIRSTSECOND两条,计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定,积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法,也叫做试剂空白校准。

  总的说来,自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度,该吸光度是通过校准确立的。

  2、样本空白:

  由于溶血、脂血、黄疸等情况,会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量,即样本空白,可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上,很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点:

  a)在双试剂测定时,加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白,所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。

  b)现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强,比如有些双试剂,R1加入后先和样本孵育一段时间,将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉,再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。

  c)现代全自动生化仪大多采用双波长测定。双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征,选择两个波长和,使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等,而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度,以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可以扣除一部分样本空白。

  d)有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算,这也叫做样品空白校准。

  3、水空白:

  比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正,如光源,比色杯等,同时在计算中起到消除“杯差”的作用。日立7060中的CellBlank(杯空白)测定的就是水空白。

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